稀释液的用水
稀释液用水一定应是干净无污染、不带离子的纯净水，带电不超过200muv，大部分用水应是经1-2次蒸馏；而用于蒸馏的水最好是雨水；操作时应检查每桶水的质量。
稀释液准备
稀释液配方：葡萄糖37g；柠檬酸钠6g；碳酸氢钠1.25g；乙胺四乙酸钠1.25g；氯化钾0.75g；加水1000ml。药物称量好放入玻璃瓶，加蒸馏水，让其溶解，再连续加水到1000 ml；稀释用水使用前最好放入恒温箱加热到35-40℃，以便药物充分溶解，多余的稀释用水可放于恒温箱保存一周。所有的稀释液都应在使用前30分钟应准备好以便药物充分溶解。稀释液还应按量加入抗生素，例：氨苄西林1g；已加过抗生素的稀释液一般可保存3天，但最好尽快用完以免药效下降。抗生素的使用应根据不同场的不同疫病情况确定。
稀释液作用
1.增加精液量
2.保护精子，使其生存环境合适，存活时间更长
-使精液温度下降不至太快,避免冷应激
-给精子提供营养
-平衡酸碱度。酸碱如果变化太大，精子头帽损坏，尾巴弯曲
-维持渗透压。渗透压变化太大，同样引起精子头帽损坏。渗透压太高，精子中水分外渗，大量精子死亡；渗透压低，精液水分渗入精子，精子水肿死亡
-控制细菌繁殖。精液细菌多会消耗精液中大量营养，同时使稀释液变酸性，最终导致精子寿命缩短。每3个月应送精液样品做细菌培养，以检查细菌对抗生素的敏感性。
0.9%生理盐水准备
称NaCl9g放盐水瓶,加水1000ml,盖严瓶口蒸煮消毒30分钟(水开时间),然后放凉即可使用。生理盐水用于清洗接触精液的器械,因其浓度与精液相同,不会造成精液渗透压变化,如用蒸馏水则可能引起精子死亡。
红玫瑰染色剂准备
称红玫瑰3g,放蒸馏水99 ml,用玻璃缸摇匀,然后加40%福尔马林1ml。此染色剂主要用于检查异常精子。
采精
人工授精与自然交配有很大的差别,采精人员一定要注意采精适量、妥善保存,一定要熟悉试验室精精液的生产的操作,避免损失。
精子在睾丸生成,然后在附睾贮存和成熟，时间长达7周。睾丸和附睾都在阴囊,由阴囊调节温度。因精子对温度变化非常敏感,自然交配时精子是从附睾直接进入母猪阴道因此无环境变化,但人工授精时精子所处温度环境则有变更,所以要特别注意采精过程的温度环境，尽量满足精子的生存要求。如采精瓶应保温,稀释过程中稀释液温度与精液温度相差不能超过10c或相同,将精液和稀释液同时放入恒温箱恒温等。
采精架规格
1.青年公猪长100-120cm；宽30-35cm；高50cm。
2.成年公猪长100-120cm；宽30-35cm；高60-70cm。
3.训练公猪上架时,年龄应在7月龄,采好精液后检查精液质量。单纯训练公猪上架时，也可不检测精液质量。公猪到八月龄时即可正式采精,精液好的用于配种,不好两周后复查。
公猪使用频率
>8-10月龄1次/周
>10-12月龄3次/2周
>1岁2次/周
采精时要穿套装工作服,工作服上衣应有2个口袋放盐水瓶、手套、纱布、卫生纸；采精瓶应是经消毒的量杯或玻璃瓶,上面盖以经消毒过的纱布,以过滤精液胶状物。
公猪爬上采精架时,采精员应戴好手套,挤净公猪包皮内尿液；脱丢手套,用生理盐水洗包皮，然后再用卫生纸擦干；用手抓住公猪伸出的阴茎,力度合适时,公猪会自动伸出阴茎；用生理盐水清洗手和阴茎头(用手套采精时,精液会更干净,且采精量多,因戴手套时可对阴茎头有较高的刺激,但手套一定要是乙烯材料制作的,用橡胶手套会杀死精子)。
为防止尿液流入采精瓶,采精员用卫生纸包在阴茎上,或抬高阴茎头部高于包皮。开始的精液是清的,作用是自然交配时冲洗阴道，里面细菌多，应丢掉，只接乳白色精液，直到阴茎回收；为避免污染，采精瓶不能放于地面；采好的精液应立即送检，应避光。
精液质量检查
采好的精液应作如下质检
1.精液量。以确定稀释量
2.颜色。正常为乳白色，无血和尿
3.气味。应为公猪气味
4.活力
5异常精子
6密度。一般应有分光光度仪检查稀释前后精子密度。
显微镜检查
1．检查精子活力和质量；2．精子异常情况。
操作方法：
1．放玻片保温器于显微镜上，调温度至40℃，则保温器表面温度可达37℃；放玻片于保温面上。
2．在盖玻璃片上面的中间和边上各点一点要检的精液（边上主要是让盖片紧连玻片），然后将盖玻片翻转放在玻片上。
3．用100倍放大镜检查活力；
4．用400倍放大检查活动情况；
5．用1000倍放大检查异常（进行此项检查时不用保温器）。
显微镜的清洁
每天工作完成后应对显微镜作如下项目的清洁：
1.每个镜头用镜头纸擦干净（包括物镜和目镜）
2.特别是1000倍物镜应先用二甲苯洗掉油，再用纱布擦镜，然后用擦镜纸擦（用过的物镜才做）
3.用干布擦镜身
4.用塑料布盖好放入贮存柜
检查精子活力
1.先轻轻摇匀精液
2.接种环用洒精灯燃烧，放凉，然后蘸取精液，点在盖玻片上
3.翻转盖片盖在凹玻片上，液滴应尽量成凸圆形且正好置于凹玻片的凹槽中
4.用100放大镜检查精子活力，检查活精占精子总数的比例
5.换400倍检查精子活动情况，主要是检查尾巴活动的强度，一般用“+”表示
活动分五类
+++活动快,看不见尾巴
++活动快，能看见尾巴
+活动慢，象滚动
±有动,但无位置移动
-死精,无活动
精滴要尽量点圆形，太扁则精子游到边上时活动缓慢困难，判定易出错。边上层数多代表密度大。每次检查活力应用保温器并调至400c的温度。
一般用于人工授精的精液应是活力70%+++，异常精子比例不超过20%，所以正常情况下，剂量应有有效精子50亿×80%，即40亿。进口公猪体形好，精子有问题时，另外考虑。
分光光度仪检查精子密度
1.调光度为50um
2.将左钮按顺时针方向扭动打开光度仪15分钟
3.调传导率为0
4.然后放入3%柠檬酸溶液，让管标号对准仪器标号
5.调左钮于传导率为100
6.拿出比色液然后再放入，仪器传导率读数应仍为100，如不是应重复3-5的操作
7.以0.8ml精液混合3%柠檬酸7.2ml摇匀，放入检测，时间为15秒，读出传导率
8.根据读数，查稀释标准图确定稀释比例，再乘以采精量，算出应添加稀释液的量
计算方法
例：采精300ml，取样2ml
1.先加稀释液300ml，比例1：1，即将精液稀释到600ml
2.将所取样混入3%柠檬酸盐溶液，用分光光度仪测量指数为6%T
3.对比标准图得出应为9倍稀释
4.最大稀释量则为9×300＝2700ml
5.已按1：1的比例稀释过的精液稀释比为2700/600＝4.5倍。若配种2头母猪时，即需拿1：1精液为200/4.5＝44.45ml200ml输精量则需加入稀释液155.55ml
精液稀释
采精后即检测活力，密度，然后稀释，稀释液和精子放35℃降温箱，倒入稀释，要顺瓶垫转动流入，同时转动精液瓶混匀，至到需要的稀释量。
稀释过程中，稀释比例越高，稀释时间越长，倒入稀释液应越慢。要保存的精液，稀释比应是1：1，大约含精子2亿/ml。
稀释液温度一定要与精液相同。
保存精液
已稀释精液，应保存于16-18℃恒温箱，此时精子消耗营养最低，PH变化小。低于14℃会杀死精子，用Kive,Modena配方时有葡萄糖、柠檬酸钠,而无脂蛋白保存温度不能低于15℃，如有脂蛋白则可能降到5℃保存。
超过20℃时，精子消耗营养多，废物多，精子易死。保存的精液应置于水中，让水作缓冲，避免温度突然变化。
恒温箱保存的精液使用前要进行检查，操作是先取1-2ml放37-38℃水中恒温，保存1天，恒温5分钟，每超过一天加10分钟。精液在保存时每天应进行1-2次滚动，保证精子均匀分布及得到充分的营养。精液一般可保存3天，再长则精子质量下降，不能用于配种。
染色检查精子异常
1．将已稀释精液轻轻摇匀，以盖玻片边缘醮一点精液，然后以盖玻片醮精液一侧接触玻片的一端并贴住玻片拉向另一端，让精液均匀分布于玻片上，晾干。
2．点70%甲基洒精固定，放3分钟，用水冲去洒精，晾干。
3．将已晾干玻片放入红玫瑰染色。
4．15分钟后，取出玻片冲洗掉染色剂，晾干。
异常精子检查
1．将做好晾干的待检玻片放于100倍显微镜下找到精子分布的区域。
2．用油点此区后转换致1000倍，微调显微镜。
3．用计数器记住不同区域所见的精子直到333个，同时记住异常精子数，算出百分比。
异常率＝异常精子数×3/10
异常精子的种类
1．头部异常：如头大，头扁
2．颈部异常：断裂，头颈不连
3．中部：歪，肥大
4．尾部：断尾，折断，卷曲
5．不成熟，细壁质滴粘在中部，尾部或颈部
精子异常原因分析
1．初级异常：在睾丸内产生，如头部异常、一部分尾巴异常（二个尾，卷尾）及中部异常。
2．二类异常：在睾丸外产生。异常产生于附睾。如尾歪、破损，头帽异常、近侧和远端液滴粘附等。可能是冷刺激，渗透压变化所致。
一般健康公猪异常精子比例不超过17%（6-10%之间），公猪如睾丸退化，头部不正常可达20%。
在检查异常精子时，必须先染色再用显微镜看。染色剂有几种：如印度墨染色剂，鲜红色染料及苯胺墨，最后2种是常用的。
精子的头帽作用在于产生酵素，帮助精子进入卵子。
一般头帽检查即检查头帽是否完整、是否变形。头帽是否正常，反映公猪健康状况，它比活力的反映更准。
头帽是否正常，检查非常复杂，不能用一般手段，应在化验室进行。
检查头帽要用(Phase contrast or differential interference contrast microscopy)，此设备价格高，附件很多。但1988年Bamba等发现鲜红及苯胺墨检查法与以上方法检测的结果也很接近。
公猪使用频率高、休息不够或年轻公猪，都会出现不成熟精子多的情况。
化验室设备用具清洁
1．所有已用过的工具都应马上水洗，特别是吸管，如已干则清洗难
2．用清水清洗所有工具，如很脏应同时使用毛刷或海绵
3．用蒸馏水再次清洗，晾干
4．高温消毒
-用干燥消毒玻璃器械时应至少消毒1.5小时(输精管不能用此法,易损坏)
-水蒸汽消毒塑料器具和输精管时消毒时间应不少于45分钟
5.消毒后的用具放进贮存柜，用消毒纱布包好或铝铂封好
*不能用洗洁精和肥皂清洗用具
人工授精工具清洗
1．所有已用过的器具应马上浸泡，用后清洗，干后难洗
2．用清水冲洗内，外
3．用蒸馏水再冲一次
4．水蒸汽消毒
5．清洗过的工作台面每周可用70%酒精消毒一次，或安装紫外线灯消毒
*不能用洗洁精和肥皂清洗
精液运输
精液运输温度与保存一样为18℃，正常范围16-18℃。如超过20℃，精子表面损坏，且不能恢复，故温度条件不能满足的情况下应避免运输。精液确需运输时，不管采采用什么方法则一定要保证需要的温度同时要避免振动。最好的方法是使用可控温的小保温箱，使用连续电源，用泡沫箱亦可，因为泡沫比其它材料保温效果好。
将运输的精液置于盖严的瓶中，用防水材料包好，放入作为介质的水中，再用海绵裹住，防止振动。水位应比精液液面高。用泡沫箱时，要先将箱内温度要降致18℃，降至此温度大约需要1小时以上的时间。有时温度会低于16℃，低于15℃时将引起精子死亡，故此要研究箱的大小，装精液量，冰块大小的配合。
